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2021-08-12

提取質(zhì)粒DNA的方法有很多種，從提取產(chǎn)量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法等，各種不同的方法各有其優(yōu)缺點，根據(jù)不同的實驗?zāi)康目梢圆捎煤线m的提取方法。堿裂解法：使用堿與SDS裂解法從E.coli（大腸桿菌）中分離制備質(zhì)粒DNA已有30多年的歷史。將細菌懸浮液暴露于高pH值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質(zhì)變性，將質(zhì)粒DNA釋放到上清中。堿性溶劑使堿基配對*破壞，閉環(huán)...

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RNA免疫共沉淀技術(shù)

2021-08-12

RNA免疫共沉淀（RNAimmunoprecipitation，RIP）是一種基于抗體的技術(shù)，用于定位體內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)相互作用。將所關(guān)注的RNA結(jié)合蛋白(RBP)與其結(jié)合的RNA一起進行免疫沉淀，鑒定結(jié)合轉(zhuǎn)錄RNA（mRNA、非編碼RNA或病毒RNA），可以通過實時PCR、微陣列或測序檢測。表觀遺傳學(xué)和RNA生物學(xué)領(lǐng)域?qū)Σ煌琑NA作用和功能的關(guān)注大大增加。據(jù)觀察，RNA的功能遠不止轉(zhuǎn)錄和后續(xù)的翻譯。例如，RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA...

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細胞凋亡檢測

2021-08-11

細胞凋亡（apoptosis）指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。下面介紹幾種常用的檢測細胞凋亡的方法。一、TUNEL法脫氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了...

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細胞周期的分析

2021-08-11

細胞周期（cellcycle）是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。細胞分裂期又稱M期。細胞通過M期一分為二，有的可繼續(xù)分裂進行周期循環(huán)，有的轉(zhuǎn)入G0期。G0期是脫離細胞周期暫時停止分裂的一個階段。但在一定適宜刺激下，又可進入周期（圖1），合成DNA與分裂。G0期的特點為：在未受刺激的G0細胞，DNA合成與細胞分裂的潛力仍然存在；當G0細胞...

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蛋白磷酸化檢測的注意事項

2021-08-02

1、樣本準備過程中防止蛋白質(zhì)降解和保留翻譯后修飾樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應(yīng)在冰上進行，并預(yù)先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位點的磷酸化抗體至關(guān)重要。磷酸化都會使蛋白質(zhì)的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導(dǎo)磷酸化課題設(shè)計可能需要在收獲前刺激細胞，以確保蛋白質(zhì)被磷酸化。例如，在...

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Western blot之蛋白轉(zhuǎn)印二三事

2021-08-02

蛋白轉(zhuǎn)印的方法蛋白轉(zhuǎn)印可選擇傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)、半干轉(zhuǎn)或快速半干轉(zhuǎn)方法。濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)：適用于大多數(shù)各種分子量的常規(guī)蛋白轉(zhuǎn)印。轉(zhuǎn)印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉(zhuǎn)印緩沖液的槽中。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)：凝膠和膜被夾在預(yù)先潤濕緩沖液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半干轉(zhuǎn)系統(tǒng)的安裝使用比濕轉(zhuǎn)簡單?？焖俎D(zhuǎn)印系統(tǒng)：快速轉(zhuǎn)印系統(tǒng)是最近發(fā)展出來的技術(shù)，使用專用設(shè)備、專用濾紙及專用緩沖液來快速有效地轉(zhuǎn)印蛋白。通常濾紙和濕潤的膜預(yù)先放在一次性包裝中，簡化了轉(zhuǎn)印“三明治”的組裝。轉(zhuǎn)印緩沖液轉(zhuǎn)印緩沖液包含強導(dǎo)電性化學(xué)緩沖試劑...

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實驗室里的不明瓶瓶罐罐不要隨意洗?。?！

2021-07-30

中山大學(xué)藥學(xué)院于7月27日發(fā)布通報，該院2021年7月27日發(fā)生一起實驗安全事故，實驗=室在清理通風柜時發(fā)現(xiàn)之前畢業(yè)生遺留在燒瓶內(nèi)的未知白色固體，一博士研究生用水沖洗時發(fā)生炸裂，炸裂產(chǎn)生的玻璃碎片刺破該生手臂動脈血管，送醫(yī)救治傷情得到控制，無生命危險。與實驗室負責老師溝通分析，導(dǎo)致炸裂的未知白色固體中可能含有氫化鈉或氫化鈣，遇水發(fā)生劇烈反應(yīng)而炸裂。實驗室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作，但是，如果你并不確定瓶內(nèi)裝的是什么東西，千萬不要隨意就拿去清洗！有些化學(xué)品遇水會發(fā)生...

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